近年來，隨著病理學(xué)研究的不斷深入，多重免疫熒光(mIHC)技術(shù)正逐步興起。mIHC是一種可以在一張組織樣本上實現(xiàn)多重分子標(biāo)記的免疫標(biāo)記技術(shù)，有助于確定靶標(biāo)的亞細(xì)胞定位、識別多種細(xì)胞類型以及解決生物標(biāo)志物的相對接近度，是研究蛋白質(zhì)表達(dá)、細(xì)胞標(biāo)志物以及分子間相互作用的重要工具。
Bioss將自主研發(fā)生產(chǎn)的高性能熒光染料與TSA酪胺信號放大技術(shù)結(jié)合，重磅推出高靈敏度的多重免疫熒光產(chǎn)品mIHC試劑盒，幫助您實現(xiàn)對低豐度靶標(biāo)的可靠檢測與成像，為您的高分文章增添色彩！
讓我們先來欣賞幾張使用Bioss mIHC試劑盒得到的多色圖像。
腸癌組織
人腦組織
大鼠腦組織
小鼠腦組織
技術(shù)原理
酪酰胺信號放大(Tyramide signal amplification, TSA)技術(shù)是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法。其原理是利用酪胺的過氧化物酶反應(yīng)，酪胺熒光素底物在HRP和H2O2的作用下被活化，產(chǎn)生的活化熒光底物能與目標(biāo)蛋白的蛋白殘基共價結(jié)合，導(dǎo)致在抗原-抗體結(jié)合位點大量沉積熒光素，實現(xiàn)信號放大。通過熱修復(fù)處理，將前一輪非共價結(jié)合的抗體洗掉，而熒光素穩(wěn)定結(jié)合在蛋白上，進(jìn)行下一輪染色。直至所有抗體孵育結(jié)束，進(jìn)行核染色，封片，掃描。
技術(shù)優(yōu)勢
相比于傳統(tǒng)的IF來說，多重免疫熒光的染色分辨率更高，熒光信號更強、更加穩(wěn)定，并且不限制一抗種屬，大大降低了實驗成本。
實驗步驟
mIHC 試劑盒產(chǎn)品線
保存條件：避光保存，-20℃可保存12個月，開封后2-8℃保存。預(yù)期用途：用于石蠟組織切片的多重?zé)晒馊旧?，配合Bioss常規(guī)兔來源或鼠來源的一抗使用。
產(chǎn)品優(yōu)勢
試劑優(yōu)化：本試劑盒中的修復(fù)/速除二合一緩沖液效果遠(yuǎn)勝普通修復(fù)液，顯著杜絕“串染”、“過修復(fù)”現(xiàn)象；快速反應(yīng)緩沖液使反應(yīng)體系不再依賴H2O2，將反應(yīng)時間從10-20 min縮短至10 sec-5 min；水晶封片劑采用抑制氣泡配方及增強型防淬滅配方，有效防止封片過程產(chǎn)生氣泡，并使TSA熒光可保存6個月-2年。
信號穩(wěn)定：TSA標(biāo)記是穩(wěn)定的共價結(jié)合，熒光信號穩(wěn)定，基本不受連續(xù)孵育、熱修復(fù)和抗體剝離處理影響。
操作簡單：可以使用同一種屬的不同一抗搭配同一二抗使用，解除抗體種屬限制，降低了實驗設(shè)計的難度和復(fù)雜性；多輪單染，每輪獨立互不干擾，極大減少了交叉反應(yīng)對實驗設(shè)計和實驗結(jié)果的影響；簡化了實驗流程，提高了實驗效率。
節(jié)省樣本：一張切片可進(jìn)行多重靶標(biāo)深度分析，節(jié)約珍貴樣本。
高分辨率及低背景：抗體更高比例的稀釋能夠降低非特異性結(jié)合。
多靶標(biāo)同時檢測與分析：mIHC技術(shù)能夠在一張切片上同時檢測多個靶標(biāo)，可以同時獲取關(guān)于細(xì)胞定量、細(xì)胞亞群分型、細(xì)胞空間排列等多個類型的信息，提供了更全面的組織分析。
高精準(zhǔn)度：mIHC技術(shù)避免了多張切片間比較可能帶來的不連續(xù)性誤差，提供了更高精準(zhǔn)度的結(jié)果。
空間位置信息的分析能力：mIHC技術(shù)易于對空間位置信息進(jìn)行分析，探究標(biāo)記物的共定位情況、表達(dá)量和空間關(guān)系，對于理解細(xì)胞間的相互作用和腫瘤微環(huán)境至關(guān)重要。
靈活的分析方式：mIHC技術(shù)的多靶標(biāo)染色結(jié)果可以靈活地進(jìn)行自由組合分析，也可以單獨拆分信號進(jìn)行分析，能夠根據(jù)實驗?zāi)康暮蛿?shù)據(jù)分析需求來定制分析方案。
定量分析：mIHC染色結(jié)果可以配合智能圖像分析軟件使用，進(jìn)行多參數(shù)分析，實現(xiàn)定量評估細(xì)胞密度、表型和定位等。
高特異性和高靈敏度：TSA信號放大，靈敏度高達(dá)傳統(tǒng)方法的100倍，能夠檢測到更低濃度的靶標(biāo)，甚至是一些傳統(tǒng)方法無法檢測到的低豐度蛋白。
